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溶菌圈大小為什麼不一樣

發布時間: 2022-09-23 20:19:16

1. 影響溶菌大小的內外因素

溶氧不足和營養條件不合適是導致容菌大小的內外因素。溶氧不足能導致菌體老化和生長停滯或者菌量逐漸減少,營養條件不合適,能導致菌體老化和芽孢分化。

2. 溶菌酶一般是由什麼細胞產生的

由細胞核糖體合成的,再由內質網包裹為溶菌酶體。

利用蛋白質和酶的生物學特異性,即蛋白質或酶與其配體之間所具有的專一性親和力而設計的色譜技術。酶一底物復合物形成之後,在一定的條件下分離復合物便得到純凈的酶。

溶菌酶化學性質非常穩定,當pH值在一定范圍內劇烈變化時,其結構幾乎不變。溶菌酶不可逆變性的臨界點是77℃,隨溶劑的變化,不可逆變性臨界點也發生變化,當溶菌酶所處溶液pH值小於1時,不可逆變性臨界點降低到43℃。



(2)溶菌圈大小為什麼不一樣擴展閱讀:

溶菌酶來自單核細胞、中性粒細胞,是一種能溶解某些細菌的酶類。可酵解革蘭氏陽性球菌壁上的乙醯氨基多糖成分,使細胞壁破裂。其分子量為14000—15000Da,可從腎小球基底膜濾出,90%以上可被腎小管重吸收,所以尿液中很少或無溶菌酶。

用一種細菌懸液作為基質,加入待測標本後保溫一定時間,如標本中含溶菌酶,則細菌被溶解,細菌懸液濁度下降或變清,可用光電比濁法測其濁度變化,或用平皿法測定其溶菌圈的大小。

3. 溶菌酶的舉例

尿溶菌酶原理
溶菌酶來自單核細胞、中性粒細胞,是一種能溶解某些細菌的酶類。可酵解革蘭陽性球菌壁上的乙醯氨基多糖成分,使細胞壁破裂。其分子量為14000萬~15000,可從腎小球基底膜濾出,90%以上可被腎小管重吸收,所以尿液中很少或無溶菌酶。用一種細菌懸液作為基質,加入待測標本後保溫一定時間,如標本中含溶菌酶,則細菌被溶解,細菌懸液濁度下降或變清,可用光電比濁法測其濁度變化,或用平皿法測定其溶菌圈的大小。
尿溶菌酶參考值
尿液中濃度為0~2mg/L。 ①腎小管疾病:如炎症、中毒時,因腎小管損害,重吸收減少,尿溶菌酶升高;
②判斷預後:急性腎小管壞死時,尿溶菌酶升高,若逐漸升高並持續不下降,小管功能恢復較差。慢性腎炎、慢性腎衰竭時,尿溶菌酶也升高;
③急性單核細胞白血病時,血清溶菌酶含量增加,超過腎小管重吸收的能力,尿內溶菌酶可升高。

4. 溶菌酶溶菌環大小不同的原因,影響直徑因素

咨詢記錄 · 回答於2021-11-03

5. 最耐熱的蛋白質是什麼

科技名詞定義

中文名稱:

溶菌酶

英文名稱:

lysozyme

其他名稱:

胞壁酸酶(muramidase)

定義:

編號:EC 3.2.1.17。存在於卵清、唾液等生物分泌液中,催化細菌細胞壁肽聚糖N-乙醯氨基葡糖與N-乙醯胞壁酸之間的1,4-β-糖苷鍵水解的酶。

應用學科:

生物化學與分子生物學(一級學科);酶(二級學科)


溶菌酶(lysozyme)又稱胞壁質酶(muramidase)或N-乙醯胞壁質聚糖水解酶(N-acetylmuramide glycanohydrlase),是一種能水解致病菌中黏多糖的鹼性酶。主要通過破壞細胞壁中的N-乙醯胞壁酸和N-乙醯氨基葡糖之間的β-1,4糖苷鍵,使細胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽,導致細胞壁破裂內容物逸出而使細菌溶解。溶菌酶還可與帶負電荷的病毒蛋白直接結合,與DNA、RNA、脫輔基蛋白形成復鹽,使病毒失活。因此,該酶具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。


中文名稱:溶菌酶

中文同義詞:脆壁質酶;雞蛋白;胞壁質酶(N-乙醯胞壁質聚糖水解酶);溶菌酶(雞蛋清)

英文名稱:Lysozyme,簡稱LZM

英文同義詞:REDUCED LYSOZYME,WATER SOLUBLE;MUCOPEPTIDE-GLYCOHYDROLASE;MUCOPEPTIDE GLYCOLHYDROLASE;MUCOPEPTIDE N-ACETYLMURAMOYLHYDROLASE;MUCOPEPTIDE N-ACETYLMURAMOYLHYDROLASE GRADE III;MUCOPEPTIDE N-ACETYLMURAMOYLHYDROLASE GRADE VI: CHLORIDE;MURAMIDASE;MURAMIDASE GRADE III[1]

CAS號:12650-88-3

EINECS號: 235-747-3[2]

分子式:無

分子量:14000左右

EINECS號:235-747-3

相關類別:發酵劑;Enzymes;酶;生化試劑;生物化學品。

分子結構圖:

性質

儲存條件:2-8°C

form:powder

color:white

危險品標志B

安全說明23-24/25-22

WGK Germany3

RTECS號 OL5989850

F3-10

白色或微白色凍乾粉,溶於水,不溶於乙醚和丙酮,pI為11.0-11.35,最適pH值6.5。

穩定性:酸性介質中可穩定存在,鹼性介質中易失活;96℃, pH值為3條件下,15min後活力保持87%。

抑制劑:有碘、咪唑和吲哚衍生物、表面活性劑(十二烷基硫酸鈉、醇類和碳鏈不少於12的脂肪酸)。1%水溶液在281.5nm處的吸光系數為26.4。通過水解細菌細胞壁的肽聚糖來溶菌。

酶反應:Micrococcus luteus或Micrococcus lysodeikticus菌懸浮液═溶菌並澄清。

用途:用於生化研究,臨床上用於急慢性咽喉炎、扁平苔癬、扁平疣等疾病的治療。

編輯本段生產

以蛋清為原料,在pH6.5條件下用弱酸性陽離子交換樹脂732吸附後,再用硫酸銨洗脫,經透析後冷凍乾燥得產品。

編輯本段制備

溶菌酶是採用生物工程技術進行克隆、提取而製取,它是一種天然酶,安全綠色的添加劑,無抗葯性。

該酶廣泛存在於人體多種組織中,鳥類和家禽的蛋清、哺乳動物的淚、唾液、血漿、尿、乳汁等體液以及微生物中也含此酶,其中以蛋清含量最為豐富。從雞蛋清中提取分離的溶菌酶是由18種129個氨基酸殘基構成的單一肽鏈。它富含鹼性氨基酸,有4對二硫鍵維持酶構型,是一種鹼性蛋白質,其N端為賴氨酸,C端為亮氨酸。可分解溶壁微球菌、巨大芽孢桿菌、黃色八疊球菌等革蘭陽性菌。

溶菌酶在等電點以下較廣泛的pH值范圍內,分子帶正電荷,可吸附於弱酸性陽離子交換樹脂上,洗脫後鹽析,可得溶菌酶沉澱,再進行精製可得成品。蛋清吸附↓724樹脂洗滌↓緩沖液洗脫↓硫酸銨溶液鹽析透析去鹼性蛋白↓NaOH凍干溶菌酶凍乾粉沉澱乾燥溶菌酶在5~10℃下,將新鮮蛋清540kg加入到已處理好的80kg 724樹脂中,攪拌吸附6h,在0~5℃靜置過夜。傾出上層蛋清,樹脂離心甩干,用蒸餾水反復洗去黏附的卵蛋白,然後將樹脂裝入柱內,用0?15mol/L、pH=6?5磷酸緩沖溶液約150L洗滌樹脂,再用約600L的10%硫酸銨溶液洗脫,收集洗脫液。洗脫液中加硫酸銨,使最終含硫酸銨量為40%,有白色沉澱生成,冷處放置過夜。虹吸上層清液,沉澱吸濾抽干,再用1倍蒸餾水溶解沉澱呈稀糊狀,然後裝入透析袋,在約5℃的條件下,對蒸餾水透析24h左右,中間換水2~3次。離心去除沉澱,沉澱再用少量水洗一次,洗液與離心液合並。再往透析清液中慢慢加入1mol/L氫氧化鈉溶液,同時不斷攪拌,使pH值上升到8?0~9?0,如有白色沉澱,即離心除去。然後用3mol/L鹽酸調pH=5?0,冷凍乾燥,即得白色片狀溶菌酶。也可將離心液用3mol/L鹽酸調pH=3?5,在攪拌下緩慢加入5%的固體氯化鈉,在約5℃的溫度下靜置48h,離心,沉澱用0℃丙酮洗滌,乾燥,即得溶菌酶。

編輯本段優點

1.溶菌酶是很穩定的蛋白質,有較強的抗熱性。蛋清溶菌酶是C型,是已知的最耐熱的酶;

2.溶菌酶不會因為有機溶劑的處理而失活,當轉移到水溶液中時,溶菌酶的活力可全部恢復;

3.溶菌酶可被冷凍或乾燥處理,且活力穩定;

4.溶菌酶適宜pH5.3~6.4,可用於低酸性食品防腐;

5.溶菌酶生產成本較低;

6.溶菌酶的抗菌譜較廣,不僅局限於G+ 菌,對部分G­ 菌也有抑制效果;

7.溶菌酶作為防腐劑安全性高。溶菌酶是一種天然蛋白質,1992年FAO/WTO 的食品添加劑協會已經認定溶菌酶在食品中應用是安全的。

編輯本段應用

醫學應用

可作為一種具有殺菌作用的天然抗感染物質。有抗菌、抗病毒、止血、消腫止痛及加快組織恢復功能等作用。臨床用於慢性鼻炎、急慢性咽喉炎、口腔潰瘍、水痘、帶狀皰疹和扁平疣等。也可與抗菌葯物合用治療各種細菌和病毒感染。口服和肌注均有效。口服,3~5片/次(腸溶片含10mg),3次/日。口含,1片/次(口含片含20mg),4~6次/日。外用:以1%~2%溶液滴注、塗擦或直接噴粉。肌注,50mg~100mg/次,1~2次/日。滴眼:用2%溶液。

副作用

偶有較輕的過敏反應。氯化溶菌酶醫療效果更廣,有濃痰分散、出血抑制、組織修復、消炎鎮痛、抗過濾性病毒等作用,因而用氯化溶菌酶的制葯有消炎消痔、治感冒、皮膚病及眼、鼻、喉等用葯.

食品應用

可作為防腐劑,它的主要功用是水解細菌細胞壁,在細胞內,則對吞噬後的病原菌起破壞作用.該酶對革蘭氏陽性菌中的枯草桿菌、耐輻射微球菌有分解作用。對大腸桿菌、普通變形菌和副溶血性弧菌等革蘭氏陰性菌也有一定程度溶解作用,其最有效濃度為0.05%。與植酸、聚合磷酸鹽、甘氨酸等配合使用,可提高其防腐效果。

應用領域

1. 溶菌酶是一種無毒、無副作用的蛋白質,又具有一定的溶菌作用,因此可用作天然的食品防腐劑。現已廣泛應用於水產品、肉食品、蛋糕、清酒、料酒及飲料中的防腐;還可以添入乳粉中,使牛乳人乳化,以抑制腸道中腐敗微生物的生存,同時直接或間接地促進腸道中雙歧桿菌的增殖。

2. 溶菌酶作為一種存在於人體正常體液及組織中的非特異性免疫因素,具有多種葯理作用,它具有抗菌、抗病毒、抗腫瘤的功效,目前醫用溶菌酶其適應症為出血、血尿、血痰和鼻炎等。

3. 溶菌酶具有破壞細菌細胞壁結構的功能,以此酶處理G+細菌得到原生質體,因此,溶菌酶是基因工程、細胞工程中細胞融合操作必不可少的工具酶。

編輯本段機理

溶菌酶能有效地水解細菌細胞壁的肽聚糖,其水解位點是N-乙醯胞壁酸(NAM)的1位碳原子和N-乙醯葡萄糖胺(NAG)的4位碳原子間的β-1.4糖苷鍵。肽聚糖是細菌細胞壁的主要成份,它是由NAM、NAG和肽「尾」(一般是4個氨基酸)組成,NAM與NAG通過β-1.4糖苷鍵相連,肽「尾」則是通過D-乳醯羧基連在NAM的第3位碳原子上,肽尾之間通過肽「橋」(肽鍵或少數幾個氨基酸)連接,NAM、NAG、肽「尾」與肽「橋」共同組成了肽聚糖的多層網狀結構,作為細胞壁的骨架,上述結構中的任何化學鍵斷裂,皆能導致細菌細胞壁的損傷。對於革蘭氏陽性菌(G+),如藤黃微球菌、枯草桿菌或溶壁微球菌等,與革蘭氏陰性菌(G-),如大腸桿菌、變形桿菌、痢疾桿菌、肺炎桿菌等,其細胞壁中肽聚糖含量不同,G+細菌細胞壁幾乎全部由肽聚糖組成,而G-細菌只有內壁層為肽聚糖,因此,溶菌酶對於破壞G+細菌的細胞壁較G-細菌強。

編輯本段使用

雞蛋清溶菌酶作為溶菌酶類的典型代表,是一種穩定的蛋白質,其最適pH為4-6.5,最適溫度為35℃,酶的最適添加量必須按照具體生產情況而定。

編輯本段儲存

建議在陰涼乾燥的環境下避光保存,儲存溫度:零度以下。

貯藏過久或貯藏條件不利,會使酶活不同程度的降低;如溫度濕度過高,則需要在使用時適當的增加使用量。

編輯本段舉例

尿液中含量

尿溶菌酶原理

溶菌酶來自單核細胞、中性粒細胞,是一種能溶解某些細菌的酶類。可酵解革蘭陽性球菌壁上的乙醯氨基多糖成分,使細胞壁破裂。其分子量為14000萬~15000,可從腎小球基底膜濾出,90%以上可被腎小管重吸收,所以尿液中很少或無溶菌酶。用一種細菌懸液作為基質,加入待測標本後保溫一定時間,如標本中含溶菌酶,則細菌被溶解,細菌懸液濁度下降或變清,可用光電比濁法測其濁度變化,或用平皿法測定其溶菌圈的大小。

尿溶菌酶參考值

尿液中濃度為0~2mg/L。

臨床意義

①腎小管疾病:如炎症、中毒時,因腎小管損害,重吸收減少,尿溶菌酶升高;

②判斷預後:急性腎小管壞死時,尿溶菌酶升高,若逐漸升高並持續不下降,小管功能恢復較差。慢性腎炎、慢性腎衰竭時,尿溶菌酶也升高;

③急性單核細胞白血病時,血清溶菌酶含量增加,超過腎小管重吸收的能力,尿內溶菌酶可升高。[3]

6. 影響抑(殺)菌圈大小的因素有哪些抑(殺)菌圈大小是否准確地反映出化學消毒劑抑(殺)菌能力的強弱

1、消毒劑在機制中的擴散速率
2、消毒劑初始濃度
3、菌對消毒劑的敏感程度

抑菌圈大小隻能在一定程度上反應殺菌能力差異,但不能准確反映。

7. 溶菌酶溶菌環大小不同的原因,影響直徑因素


溶菌酶( lysozyme )主要是由吞噬細胞合成並分泌的一種小分子粘性蛋白,屬乙醯多糖酶。存在於唾液、、淚液和鼻及氣管等分泌物中,能溶解革蘭氏陽性細菌。由於它的高等電點( pH11.0 ),使它能與細菌牢固結合,並水解細菌細胞壁肽聚糖,使細菌裂解死亡。 本實驗在平板上進行唾液…

溶菌酶( lysozyme )主要是由吞噬細胞合成並分泌的一種小分子粘性蛋白,屬乙醯多糖酶。存在於唾液、、淚液和鼻及氣管等分泌物中,能溶解革蘭氏陽性細菌。由於它的高等電點( pH11.0 ),使它能與細菌牢固結合,並水解細菌細胞壁肽聚糖,使細菌裂解死亡。

本實驗在平板上進行唾液酶的測定。溶菌酶與枯草芽胞桿菌( Bacillus subtilis )作用後,可使該菌因細胞壁破壞而溶解,致使瓊脂板加樣孔周圍出現溶菌環。溶菌環直徑與樣品中溶菌酶含量的對數呈直線關系。

【材料】

1? 無菌 PBS ( pH6.4 , 1/15mol/L ), 5mol/LKOH , 3%PBS 瓊脂,溶菌酶標准品,受驗者唾液。

2? 枯草芽胞桿菌 12 小時培養物。

3? 10×100 試管,試管架,無菌平皿,打孔器,微量加樣器。

4? 分光光度計,水浴箱,溫箱等。

【方法】

  1. 菌液配製:將 PBS 加入枯草芽胞桿菌斜面,置室溫 5-10 分鍾後製成菌懸液;在波長 640nm 處,測定菌懸液的濃度,並將菌液濃度調至透光率 30-40% 。

  2. 2. 溶菌酶標准液配製:稱取溶菌酶標准品,用 PBS 配成 1000 m g/ml ,置冰箱凍存,臨用時再稀釋成 100 、 50 、 25 和 10 m g/ml 。

  3. 3. 收集唾液標本:待檢測者用清水漱口後,將唾液收集於消毒平皿內待用。

  4. 4. 加熱融化 3% 瓊脂,冷至 60 -70℃ ,與預熱好的枯草芽胞桿菌菌懸液等體積混合,到平板。用打孔器在平板上打孔,孔間距約 1.5cm , 每平板可打孔 8-9 個。

  5. 5. 各孔內依次加溶菌酶標准品和唾液樣品,每孔 20 m l 。

  6. 6. 置於 24 -26 ℃ 12-18 小時後測量溶菌環直徑。

  7. 【結果判斷】

  8. 記錄溶菌環的直徑( mm )於下表,繪制標准曲線,並從標准曲線上查出所測樣品的溶菌酶含量。




8. 溶菌環為什麼不叫抑菌圈

溶菌環中的菌類是沒有活性的死菌,而抑菌圈中的菌是還有生物學活性的菌。

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