制備膠體金為什麼顏色紫

A. 膠體金原理，要簡述

膠體金溶液是指分散相粒子直徑在l—150 nm之間的金溶膠，屬於多相不均勻體系，顏色呈桔紅色到紫紅色．膠體金作為標記物用於免疫組織化學始於1971年,Faulk等應用電鏡免疫膠體金染色法(IGS)觀察沙門氏菌,此後他們把膠體金與多種蛋白質結合.1974年Romano等將膠體金標記在第二抗體（馬抗人IgG）上，建立了間接免疫膠體金染色法。1978年geoghega發現了膠體金標記物在光鏡水平的應用。膠體金在免疫化學中的這種應用，又被稱為免疫金．之後，許多學者進一步證實膠體金能穩定又迅速地吸附蛋白質，而蛋白質的生物活性無明顯改變．它可以作為探針進行細胞表面和細胞內多糖、蛋白質、多膚、抗原、激素、核酸等生物大分子的精確定位,也可以用於日常的免疫診斷，進行免疫組織化學定位，因而在臨床診斷及葯物檢測等方面的應用已受到廣泛的重視．目前電鏡水平的免疫金染色(IGS)，光鏡水平的免疫金銀染色(IGSS)，以及肉眼水平的斑點免疫金染色技術日益成為科學研究和臨床診斷的有力工具．
膠體性質膠體金顆粒大小多在1～100nm，微小金顆粒穩定地、均勻地、呈單一分散狀態懸浮在液體中，成為膠體金溶液。膠體金因而具有膠體的多種特性，特別是對電解質的敏感性。電解質能破壞膠體金顆粒的外周永水化層，從而打破膠體的穩定狀態，使分散的單一金顆粒凝聚成大顆粒，而從液體中沉澱下來。某些蛋白質等大分子物質有保護膠體金、加強其穩定性的作用。
呈色性微小顆粒膠體呈紅色，但不同大小的膠體呈色有一定的差別。最小的膠體金（2～5nm）是橙黃色的，中等大小的膠體金（10～20nm）是酒紅色的，較大顆粒的膠體金（30～80nm）則是紫紅色的。根據這一特點，用肉眼觀察膠體金的顏色可粗略估計金顆粒的大小。近10多年來膠體金標記已經發展為一項重要的免疫標記技術．膠體金免疫分析在葯物檢測、生物醫學等許多領域的研究已經得到發展，並越來越受到相關研究領域的重視．光吸收性膠體金在可見光范圍內有一單一光吸收峰，這個光吸收峰的波長（λmax）在510～550nm范圍內，隨膠體金顆粒大小而變化，大顆粒膠體金的λmax偏向長波長，反之，小顆粒膠體金的λmax則偏於短波長，表1所列為部分膠體金的λmax。
表 四種粒徑膠體金的制備及特性
膠體金粒徑（nm） 1％檸檬酸三鈉加入量（ml）* 膠體金特性
呈色 λmax
16 2.00 橙色 518nm
24.5 1.50 橙紅 522nm
41 1.00 紅色 525nm
71.5 0.70 紫色 535nm

B. 膠體金試紙條的測試原理是什麼

膠體金快速檢測卡是採用膠體金免疫層析技術研製而成的，此技術是90年代初在免疫滲透技術的基礎上建立的一種快捷簡單的免疫學檢測技術，市場上一般用到的有雙抗體夾心法、雙抗原夾心法、小分子競爭法等等。 膠體金是氯金酸(HAuCl4)在還原劑如白磷、抗壞血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等作用下，金離子還原後聚合成的一定大...小的金顆粒，它由一個基礎的晶核（11個金原子形成的二十面體）和包圍在外的雙離子層構成（內層為負離子層AuCl2－，外層是帶正電荷的H＋）。由於靜電作用，金顆粒之間相互排斥而懸浮成為一種穩定的膠體狀態，形成帶負電的疏水膠溶液，故稱膠體金。 。質量差的溶液燒制後，液面有漂浮物，大小不一，形狀各異。膠體金顆粒大小，決定了我們用肉眼觀察到的膠體金溶液顏色，由紅到紫色。 膠體金一般在弱鹼環境下帶負電荷，會與蛋白質分子的正電荷基團形成牢固的結合，一般稱這種結合叫靜電結合，所以不影響蛋白質的生物特性。除了與蛋白質結合以外，它還可以與許多其它生物大分子結合，如SPA、PHA、ConA等。根據膠體金的一些物理性狀，如高電子密度、顆粒大小、形狀及顏色反應，加上結合物的免疫和生物學特性，從而使膠體金廣泛地應用於免疫學、組織學、病理學和細胞生物學等領域。 膠體金標記技術，實質上是蛋白質等高分子被吸附到膠體金顆粒表面的包被過程。用於膠體金標記的蛋白必須要經過前處理，其目的在於 1、去除高濃度的鹽分，高濃度的鹽分往往干擾蛋白與膠體金的吸附結合，或導致膠體金粒子的凝聚，這一步往往採用低濃度緩沖液來進行。 2、使蛋白分子盡量分散為單體，凍干蛋白或高濃度蛋白溶液中蛋白分子往往凝聚為多聚體大分子，可同時與多個膠體金粒子結合，影響標記的靈敏度和定量分析。 3、使蛋白具有適當的分子量。蛋白分子量過小（30 kD），形成的蛋白復合體往往是不穩定，可短時間內失活。而分子量過大時，被認為影響探針的靈敏度，特別是已知蛋白的結構與活性中心的情況下，去除對活性影響的結構部分是提高標記靈敏度，延長探針壽命（防止凝集）的有效辦法。把分子量過小的蛋白與其它蛋白（如牛血清蛋白等）結合後，能制備出穩定性更強的探針。 當蛋白前處理完成後，接著要確定膠體金與蛋白結合的最佳pH值。對於理化性質不確定的蛋白這一步尤為重要。過量的蛋白與不同pH值的膠體金結合後，只有某一特定pH值能夠形成結合最穩定的探針。在高濃度電解質（如NaCl）作用下不會凝聚。不同蛋白的適宜pH范圍的寬窄大不相同。一般選擇最小適宜pH值為最佳pH值。但有些探針的實際情況並不完全如此，最穩定的探針並不完全代表活性最好，這要靠實驗驗證。 在確定最佳pH值後，最後要確定最小蛋白量，即能夠形成穩定探針的蛋白的最小量。如果在制備探針時加入太多的蛋白，不僅造成浪費，而且更為嚴重的是容易造成探針凝聚，並嚴重影響標記活性。因為探針溶液中的游離蛋白容易搶先與標記位點結合，起到「封閉」（Blocking）作用，而膠體金探針標記不上。在標記位點希少、被標記物含量較少的情況下要特別注意。 膠體金具有很高的動力學穩定性，在穩定因素不受破壞時自身凝聚極慢，可放置數年不發生凝聚。影響穩定的因素主要有電解質、溶膠濃度、溫度、非電解質等。金溶膠必須有少量電解質作穩定劑，但濃度不宜過高。高濃度親水性非電解質能剝去膠粒外面的水化膜使其凝聚。少量的高分子物質促使溶膠凝聚，但一定量的高分子物質反而可增加溶膠穩定性，如蛋白質、葡萄糖、PEG20000等的加入有良好的穩定效果。. 當金溶膠吸附蛋白質後，溶膠的穩定性隨溶液pH而變化，而這種變化又取決於吸附蛋白質的等電點，如ConA，過氧化物酶等，當pH較低時保持穩定，提高pH則顯得不穩定，接近等電點或略高時又變得穩定了。標記後的膠體金溶液可用0.2～0.5mg/ml PEG20000 作為穩定劑。在4～10℃貯存數月有效，不宜冰凍。貯存中可能會發生程度不同的凝聚，可離心除去。 當今國內有很多膠體金試紙條生產廠商，江浙這一帶尤為突出，推薦廠家：蘇州快捷康生物技術有限公司。