為什麼pcr每次結果不一樣
❶ PCR結果不穩定的原因是什麼
1、操作者不熟練,加樣時存在取樣誤差
2、PCR儀器不穩定,如溫度,濕度影響
3、試劑不穩定,如你的DNA模板降解,Taq酶活性下降等
❷ 做PCR的時候為什麼同樣的東西同樣的操作,結果就是會不一樣呢,有時候連帶都不出,
檢查儀器,或者其他什麼原因!或者是某些步驟沒作到位,做理學實驗就是這樣!要有耐心,要不然不天天有人拿諾貝爾,生物實驗可能N個實驗才成功一個!
❸ 為什麼兩次PCR的結果差這么多
終點電量是有誤差的,擴增循環數盡量不要太高,不能進入平台期 最好用實時定量PCR進行定量
❹ 普通的PCR,一樣的體系,程序,為什麼結果不同
引物沒什麼可說的,pcr是擴增「指定片段」的實驗方法,「指定片段」如何指定?自然就是靠上游和下游引物來前後固定擴增片段的位置。
tween-20是用來中和的。如果你的模板是自己從組織或者細胞里提的dna,可能會混有少量影響pcr酶的化學物質(sds、酚、乙醇什麼的),這時可加一點tween,或者triton
x100,或者np40什麼的解決。
bsa是穩定酶用的。一般都在酶切的時候加,pcr的時候不常用到。
❺ pcr驗證結果每次都不一樣,這是為什麼
說的太簡單了, 把你的問題說詳細點啊
❻ 百度同一個樣 PCR 結果為什麼不同
我也經常做pcr,我覺得很多因素都會影響到PCR結果,如溫度,酶的量,酶的活性,主要還有模板的質量。
向我們做RNA的PCR 把樣品從冰箱里拿出來每次凍融之後PCR結果都不太一樣,因為樣品會被降解,效果一次不如一次,而酶經過反復冷凍活性也會降低
❼ 同一個樣 PCR 三次 結果趨勢 為什麼不同
對PCR擴增反應的終點產物進行定量和定性分析,無法對起始模板准確定量,以電泳為基礎的半定量RT-PCR本身誤差比較大。
一般情況下,要做好半定量的RT-PCR,注意以下幾點:
1、做混合管,減少系統誤差
2、選擇質量好的移液器和吸頭
3、最終要的是,不能讓PCR進入平台期,否則極易出現你這樣的情況。可以減少PCR循環數。可以20循環,25循環,30循環跑電泳,最低循環能出條帶,就按最低的比較。
❽ 做q-pcr,相同的標本為什麼每次做結果不同
注意操作的一致性以及穩定性,一般情況下不同批次是有批間差的,但是實驗流程相對比較成熟的實驗室,或者老師批間差不會很大,我們實驗室要求相同樣本批間差在0.2Cycle以內。建議你多做幾組重復。
❾ 我自己設計引物,每次PCR結果條帶大小都不一樣,還有時候有有時候沒有。操作沒問題,我是不是應該換引物
在已經構建好的質粒上P條帶,如果有非特異性擴增:
1.提高退火溫度,或者加DMSO
2.引物設計有問題,與載體的全序列做一下BLAST
3.模板問題,有些模板如果是高GC含量等原因,很難P
❿ 求助,PCR每次結果不一樣
如果提取RNA是為了測定基因的相對表達量,那麼逆轉錄時各樣本間總RNA的量要保持一致,就像你說的A加1.5,B加1,使得總量為3ug。這樣才能保證在之後RT-PCR比較基因表達量時,各個樣本都站在同一起跑線上。