熒光壽命測試時間為什麼很慢

⑴ 時間分辨熒光

時間分辨熒光分析法（Time resolved fluoroisnmunoassay,TRFIA）是近十年發展起來的一測微量分析方法，是目前最靈敏的微量分析技術,其靈敏度高達10-19，較放射免疫分析（RIA）高出3個數量級。

時間分辨熒光分析法（TRFIA）實際上是在熒光分析（FIA）的基礎上發展起來的，它是一種特殊的熒光分析。熒光分析的利用了熒光的波長與其激發波長的巨大差異克服了普通紫外－可見分光分析法中雜色光的影響，同時，熒光分析與普通分光不同，光電接受器與激發光不在同一直線上，激發光不能直接到達光電接受器，從而大幅度的提高了光學分析的靈敏度。但是，當進行超微量分析的時候，激發光的雜散光的影響就顯得嚴重了。因此，解決激發光的雜散光的影響成了提高靈敏度的瓶頸。

解決雜散光影響的最好方法當然是測量時沒有激發光的存在。但普通的熒游標志物熒光壽命非常短，激發光消失，熒光也消失。不過有非常少的稀土金屬（Eu、Tb、Sm、Dy)的熒光壽命較長，可達1－2ms，能夠滿足測量要求，因此而產生了時間分辨熒光分析法，即使用長效熒游標記物，在關閉激發光後再測定熒光強度的分析方法。

平時常用的稀土金屬主要是Eu(銪）和Tb(鋱），Eu熒光壽命1ms,在水中不穩定，但加入增強劑後可以克服；Tb熒光壽命1.6ms，水中穩定，但其熒光波長短、散射嚴重、能量大易使組分分解，因此從測量方法學上看Tb很好，但不適合用於生物分析，故Eu最為常用。

由於常用Eu作為熒游標記，因此增強劑就成了試劑中的重要組成。增強劑原理：利用含絡合劑、表面活性劑的溶液的親水和親脂性同時存在，使Eu在水中處於穩定狀態。現在有些試劑，在絡合Eu在抗體上時已考慮了增強問題，而使用了具有增強作用的新絡合劑，因而有的試劑沒有單獨的增強劑。

隨著檢驗醫學的發展，對微量、超微量的測定會越來越多，同時RIA的污染問題會越來越被重視，因此，時間分辨熒光分析法（TRFIA）具有越來越大的應用空間。

⑵ 請問熒光壽命數據如何處理

用指數函數擬合得到半衰期，也就是熒光壽命

⑶ 熒光曝光時間太長是因為熒光太弱嗎

不是。熒光曝光時間太長是因為顯微鏡汞燈使用時間長，造成燈的壽命變短導致熒光弱，因此曝光時間太長不是熒光弱。熒光是一種光致發光現象，當某種常溫物質經某種波長的入射光照射，吸收光能後進入激發態。

⑷ 熒光壽命變化的機理解釋

熒光壽命是由電子在與基態自旋多重度相同的穩定激發態的壽命決定的。有很多機理可以改變這個壽命－－－系統間穿躍(intersystem crossing), 淬滅(quench)，熱馳豫(thermal relaxation), 等。

⑸ 熒光內在壽命

1）熒光物質的熒光壽命與自身的結構、所處微環境的極性、粘度等條件有關,因此通過熒光壽命測定可以直接了解所研究體系發生的變化。
（2）熒光現象多發生在納秒級,這正好是分子運動所發生的時間尺度,因此利用熒光技術可以「看」到許多復雜的分子間作用過程,例如超分子體系中分子間的簇集、固液界面上吸附態高分子的構象重排、蛋白質高級結構的變化等。
當某種物質被一束激光激發後，該物質的分子吸收能量後從基態躍遷到某一激發態上，再以輻射躍遷的形式發出熒光回到基態。當去掉激發光後，分子的熒光強度降到激發時的熒光最大強度I0的1/e所需要的時間，稱為熒光壽命，常用τ表示。

⑹ 測微秒級別的熒光壽命時間要很久嗎

不要。
測微秒級別的熒光壽命時間范圍在0.2到20納秒之間。熒光壽命與熒光染料的濃度無關。無論樣品結構僅有零星熒光染料還是載滿熒光染料：壽命信號始終相同，並表明在同一環境中存在相同的熒光染料。
因此，熒光壽命不受光漂白的影響。樣品深處的圖像將比表面圖像暗得多——但壽命並沒有改變。這是壽命測定的主要優勢。