为什么pcr每次结果不一样
❶ PCR结果不稳定的原因是什么
1、操作者不熟练,加样时存在取样误差
2、PCR仪器不稳定,如温度,湿度影响
3、试剂不稳定,如你的DNA模板降解,Taq酶活性下降等
❷ 做PCR的时候为什么同样的东西同样的操作,结果就是会不一样呢,有时候连带都不出,
检查仪器,或者其他什么原因!或者是某些步骤没作到位,做理学实验就是这样!要有耐心,要不然不天天有人拿诺贝尔,生物实验可能N个实验才成功一个!
❸ 为什么两次PCR的结果差这么多
终点电量是有误差的,扩增循环数尽量不要太高,不能进入平台期 最好用实时定量PCR进行定量
❹ 普通的PCR,一样的体系,程序,为什么结果不同
引物没什么可说的,pcr是扩增“指定片段”的实验方法,“指定片段”如何指定?自然就是靠上游和下游引物来前后固定扩增片段的位置。
tween-20是用来中和的。如果你的模板是自己从组织或者细胞里提的dna,可能会混有少量影响pcr酶的化学物质(sds、酚、乙醇什么的),这时可加一点tween,或者triton
x100,或者np40什么的解决。
bsa是稳定酶用的。一般都在酶切的时候加,pcr的时候不常用到。
❺ pcr验证结果每次都不一样,这是为什么
说的太简单了, 把你的问题说详细点啊
❻ 百度同一个样 PCR 结果为什么不同
我也经常做pcr,我觉得很多因素都会影响到PCR结果,如温度,酶的量,酶的活性,主要还有模板的质量。
向我们做RNA的PCR 把样品从冰箱里拿出来每次冻融之后PCR结果都不太一样,因为样品会被降解,效果一次不如一次,而酶经过反复冷冻活性也会降低
❼ 同一个样 PCR 三次 结果趋势 为什么不同
对PCR扩增反应的终点产物进行定量和定性分析,无法对起始模板准确定量,以电泳为基础的半定量RT-PCR本身误差比较大。
一般情况下,要做好半定量的RT-PCR,注意以下几点:
1、做混合管,减少系统误差
2、选择质量好的移液器和吸头
3、最终要的是,不能让PCR进入平台期,否则极易出现你这样的情况。可以减少PCR循环数。可以20循环,25循环,30循环跑电泳,最低循环能出条带,就按最低的比较。
❽ 做q-pcr,相同的标本为什么每次做结果不同
注意操作的一致性以及稳定性,一般情况下不同批次是有批间差的,但是实验流程相对比较成熟的实验室,或者老师批间差不会很大,我们实验室要求相同样本批间差在0.2Cycle以内。建议你多做几组重复。
❾ 我自己设计引物,每次PCR结果条带大小都不一样,还有时候有有时候没有。操作没问题,我是不是应该换引物
在已经构建好的质粒上P条带,如果有非特异性扩增:
1.提高退火温度,或者加DMSO
2.引物设计有问题,与载体的全序列做一下BLAST
3.模板问题,有些模板如果是高GC含量等原因,很难P
❿ 求助,PCR每次结果不一样
如果提取RNA是为了测定基因的相对表达量,那么逆转录时各样本间总RNA的量要保持一致,就像你说的A加1.5,B加1,使得总量为3ug。这样才能保证在之后RT-PCR比较基因表达量时,各个样本都站在同一起跑线上。